224吉林大学动物科技实验教学中心
《动物生物化学》实验教学大纲
教学单位：畜牧兽医学院
课程名称：动物生物化学
英文名称：Animal Biochemistry
课程代码：09281047
课程类别：学科专业基础课程
课程性质：必选课
学 时 数：课程68学时，实验20学时
课程学分：2.5学分
开课学期：第三学期
面向专业：动物医学专业和动物科学专业
一、实验课程教学目的与任务
《动物生物化学》实验课程是动物医学专业的一门专业限选课，通过本课程的学习，理解动物生物化学研究方法的基本原理，掌握动物生物化学实验的基本操作技能，提高学生的动手能力。主要实验内容为肝脏DNA的提取，动物血清蛋白质的分离纯化及检测和鉴定；所学技术主要包括层析技术、电泳技术、分光光度技术和离心技术等。通过对以上内容和技术的学习，使学生为以后开展生化及相关学科的科学研究打下良好基础。
二、实验教学基本要求
1. 学生在实验前要对所学的实验原理和实验技术有一个基本了解，通过阅读实验教材、查询有关资料和实验注意事项；能够独立完成实验内容、撰写合格的实验报告；培养学生独立实验的能力，逐步形成自主实验的基本素质。
2. 掌握动物组织或植物组织DNA的提取方法，熟悉离心机各种离心方法的操作、应用和注意事项。。
3. 熟悉层析技术的分类及应用，掌握各种层析方法的操作流程及在操作中应注意的问题（如层析柱的制备、洗脱液的洗脱速度、胶的再生、蛋白质的检测等）。
4. 熟悉SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及应用，掌握电泳垂直板凝胶的制备，电泳过程中电流、电压的选择，凝胶的染色和脱色等。
5. 熟悉分光度光度技术的原理及各种蛋白质检测方法的优缺点，主要掌握紫外吸收和G250法在蛋白质含量检测中的应用。
三、学生应掌握的实验技术及基本技能
1.学生要基本掌握所开实验的基本原理，掌握分光光度技术、电泳技术、离心技术、层析技术等操作方法及在科研和生产实践中的应用。
2.掌握各项种分光光度技术在生物大分子检测中的应用及其优缺点；掌握分子筛层析、离子交换层析、亲和层析在生物大分子分离纯化中的具体应用及注意事项；掌握SDS-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质分子量的方法，不连续聚丙烯凝胶电泳对蛋白质分离及纯度鉴定的应用。
3.培养和提高学生独立操作的能力。使学生较为系统全面地掌握运用生物化学研究的技术和方法。
四、实验项目内容、学时分配和每组人数
序号
实验项目
内容提要
学时分配
每组人数
实验类型
实验性质
1
盐析及凝胶过滤分离血清γ-球蛋白
盐析和凝胶过滤除盐
4
2
综合性
必做
离子交换层析纯化血清γ-蛋白
利用蛋白质等点不同纯化血清γ-蛋白
3
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质
根据蛋白质不同形状、电荷和大小分离血清各种蛋白质
基础性
动物肝脏DNA的提取和鉴定
利用DNP和RNP溶解度的区别分离和鉴定DNA
5
蛋白质含量测定
根据朗波-比尔定律原理测定蛋白质含量
五、实验教材及主要参考书：
[1]刘松财,张明军，李莉.生物化学实验技术.第1版.吉林:吉林大学出版社,2009.06
[2]郭勇. 现代生化技术.第二版.科学出版社 2004.09.
[3]袁辉.药物蛋白质分离纯化技术.化学工业出版社.2005.03
六、考核要求、考核方式及成绩评定标准
以实验报告、实验理论考核、课堂表现综合考核给出实验成绩。
本课程考核办法一般是每次实验后要书写实验报告，根据实验报告的具体要求给出成绩。实验课内容在理论课考试时占10%，平时实验课成绩占生物化学总成绩20%。
实验课出勤率及课堂表现占10%，实验报告（书面）（包括书写规范性、完整性及实验数据的正确性）占90%。
七、制订人：
八、审核人： 日 期：2009年11月13日
九、学院审定记录：
本实验教学大纲已经教学委员会审核通过。
教学院长签字：
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称：动物科技实验教学中心 实验室名称：生物化学与酶工程实验室
实验项目所属课程名称
动物生物化学
课程编号
09281047
课程类别
(打√)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
动物医学和动物科学
√
基础
设计
综合
研究
选做
其他
实验项目名称
实验项目编号
0928104701
实验学时数
实验分组情况
每组 1 人
实验目的
了解分光光度技术的基本原理及应用。掌握各种蛋白质检测方法的操作步骤及各种检测方法的优缺点。
实验内容
G250方法检测血清蛋白质含量，包括两种方法：标准曲线和公式计算法。紫外分光光度法检测血清蛋白质含量。
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
紫外可见分光光度计
T6新世纪
1台
本实验项目
消耗材料物品
标准牛血清白蛋白
G250考马氏亮蓝
氯化钠
备注
说明：1、课程编号可从本专业的课程计划中查找，实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
任课教师(签名)： 专业负责人(签名)： 主管院长(签名)：
填表日期： 2009 年 8 月 28 日
0928104702
每组 2 人
本实验的主要目的是通过蛋白质的盐析和凝胶过滤脱盐，掌握盐析和凝胶过滤实验的原理、操作步骤、注意事项，及该技术在生物大分子分离纯化中的应用。
根据不同蛋白质在不同浓度饱和硫酸铵溶度的不同，本实验首先采用33%饱和硫酸铵溶度对血清γ-球蛋白进行初步盐析沉淀；再根据不同大小分子量蛋白质在经过凝胶层析柱洗脱时，洗脱出层析柱的先后顺序不同，将蛋白质和硫酸铵分离，再经过对蛋白质和硫酸铵的检测，对实验进行验证。
离心机
TGL-16B
部分收集器
SZ-100
蠕动泵
HL-2
核酸蛋白检测仪
HD21-88
硫酸铵
葡聚糖凝胶G25
醋酸铵
磺基水杨酸
氯化钡
血清
0928104703
了解离心技术的基本原理及应用中注意事项。掌握动物肝脏DNA的提取和鉴定方法及原理。
本实验第一步根据DNP和RNP在不同浓度氯化钠溶液中溶解度不同，从动物肝脏中提取DNA；第二步通过对核酸的水解及显色反应，对脱氧核糖和嘌呤及磷酸进行鉴定。
水浴锅
SSW-420-2S
1个
硫酸
氢氧化钠
磷酸
鸡肝
0928104704
本实验的主要目的是了解SDS垂直板电泳的基本原理，掌握操作步骤、注意事项，及该技术在生化和分子生物研究中的应用。
将丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺按一定比例制备垂直板电泳凝胶，将血清样品点在点样孔的相应位置，通电进行电泳，电泳结束后进行蛋白染色和脱色。。
电泳仪
DYY-10C
电泳槽
DYCZ-24DN
丙烯酰胺
甲叉双丙烯酰胺
盐酸
TEMED
过硫酸铵
Tris
巯基乙醇
离子交换层析分离血清蛋白质
0928104705
本实验的主要目的是通过对血清蛋白质的离子交换分离和纯化，掌握离子交换层析实验的原理、操作步骤、注意事项及该技术在生物大分子分离纯化中的应用。
根据不同蛋白质具有不同的等电点，采用阳离子或阴离子交换剂，对带有不同电荷的蛋白质进行分离。采用DEAE纤维素装柱，缓冲液pH值为6.5，血清样品通过层析柱，将白蛋白和球蛋白分离，再调溶液的离子强度将β球蛋白和γ球蛋白分离，通过琼脂糖扩散电泳，检测γ球蛋白。
M309169
DYCZ-24D
DEAE32，
琼脂糖
乙酸胺
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