tjb吉林大学动物科技实验教学中心
仪器分析》实验教学大纲
教学单位：畜牧兽医学院
课程名称：仪器分析
英文名称：Instrumental Analysis
课程代码：07281019
课程类别：学科基础课
课程性质：选修课
学 时 数：课程30学时，实验10学时
课程学分：1.5学分
开课学期：第四学期
面向专业：动物医学、动物科学(实验动物)、生物技术(动物)、生物技术（植物)专业
一、实验课程教学目的与任务
《仪器分析》实验课程的教学目的是使学生规范地掌握仪器分析的基本操作、基本技术，熟悉现代分析仪器的使用；在培养学生掌握实验的基本知识、基本操作和基本技能的同时，努力培养学生的创新意识与创新能力，使学生在已学过化学分析、物理化学等课程的基础上，学习和掌握仪器分析方法的基本理论、各类仪器分析的基本原理、仪器构造和定性定量分析方法。其任务是通过本课程的学习，使学生重点掌握聚光共聚焦的使用原理，透射电镜和扫描电镜的样品制备和仪器的基本操作，掌握其它各种仪器分析方法的基本原理、特点、适用范围和使用方法，具有应用仪器进行分析操作的基本技能。
二、实验教学基本要求
1.实验前学生必须了解实验守则及实验室安全制度等。掌握实验原理、操作步骤、注意事项。
2.进入电子显微镜、激光共聚焦实验室必须穿实验服，带一次性手套和鞋套，以保证实验室的清洁卫生。
3.通过对电镜样品观察、激光共聚焦、Real-time PCR课程的学习，使学生能够在实验中发现问题、分析问题并学习解决相关问题的科学方法，逐步提高学生综合运用所学知识和技能解决实际问题的能力，激发学生的学习主动性。培养学生严谨、细致、实事求是的科学作风，养成分析工作整洁、有序、珍惜仪器设备的良好实验习惯。
三、学生应掌握的实验技术及基本技能
1.了解聚光共聚焦、透射电镜、扫描电镜、PCR仪、薄层扫描仪和超速离心机等主要仪器的基本原理、特点及适用范围。
2.熟悉各种分析仪器的构造、特点，掌握正确的使用方法；掌握大纲所规定的各个实验的方法原理和基本操作技能。
四、实验项目内容、学时分配和每组人数
序号
实验项目
内容提要
学时
分配
每组
人数
实验
类别
性质
1
透射电镜及超薄切片技术
取材，固定，脱水，浸透与包埋，聚合，修块，切片，染色，电镜观察及拍照。
2
基础性
必做
扫描电镜及生物样品制备技术
取材，固定，脱水，临界点干燥，离子溅射
3
高速和超速离心机及离心技术
离心机原理与结构，高速与超速离心机的区别。样品的预处理及装载。差速离心法、速率区带离心法、等密度离心法操作流程及注意事项。高速离心机：东德产K70；超速离心机：日立公司产CP56G、SCP85H。
4
细胞内核酸的标记方法
激光共聚焦显微镜使用及注意事项；细胞内核酸的标记方法。
研究性
5
石蜡组织切片的间接免疫荧光染色法
固定及取材；常规脱水、透明、浸蜡、包埋及切片；常规脱蜡至水，封闭液封闭；一抗孵育；漂洗；二抗孵育；漂洗；复染，甘油封片，上机观察。
综合性
6
R-time PCR及薄层扫描仪的使用
荧光定量的原理及其意义； 薄层扫描法的原理、方法及其分类。
五、实验教材及主要参考书：
1.陈培榕，邓勃编.现代仪器分析实验与技术[M].清华大学出版社，2001。
2.赵文宽，张悟铭等.仪器分析实验[M].高等教育出版社，2007
3.张济新，孙海霖等.仪器分析实验[M].高等教育出版社，2005
4.张剑荣.仪器分析实验[M].科学出版社，2008.
六、考核要求、考核方式及成绩评定标准
以实验报告、出勤、课堂表现综合考核给出实验成绩。实验课出勤率及课内表现占20%，实验报告（书面）（包括书写规范性、完整性及实验数据的正确性）占80%。
七、制订人：周玉 王心蕊张俊辉 张媛媛 辛毅
八、审核人：柳增善 日 期：2009年11月13日
九、学院审定记录：
本实验教学大纲已经学院教学委员会审核通过。
教学院长签字：
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称：动物科技实验教学中心 实验室名称：人兽共患病研究教育部重点实验室
实验项目所属课程名称
仪器分析
课程编号
07281019
课程类别
(打√)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
动物医学、生物技术(动物、植物)
√
实验类型
基础
设计
综合
研究
实验性质
选做
其他
实验项目名称
实验项目编号
0728101901
实验学时数
实验分组情况
每组 2 人
实验目的
了解超薄切片技术。通过超薄切片的制作，进一步了解透射电镜的工作原理和使用方法及透射解电镜的应用范围。
实验内容
(1)取材：组织块大小约为1mm3。(2) 固定：固定是指用化学固定剂或冷冻、高温及干燥等物理方法迅速杀死细胞的过程。(3) 脱水：脱水是指将组织中的游离水彻底清除的过程。由于常有的包埋剂大都是非水溶性树脂，只有将生物组织中的游离水清除干净，包埋剂才能浸入组织。(4) 浸透与包埋：浸透是用包埋剂逐渐取代组织中的脱水剂，使细胞内外空隙被填充。包埋是将浸透好的组织放在填有包埋剂的平板模具或胶囊中。(5) 聚合：包埋剂在一定温度下聚合成既坚固又稳定的固体结构。(6) 修块：修去组织块周围空白包埋介质。(7) 切片：超薄切片，厚度一般为50-100nm。(8) 染色：生物组织超薄切片的染色通常采用醋酸双氧铀和柠檬酸铅双染法。(9) 电镜观察及拍照。
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
日立透射电镜
H-7650
1台
LKB超薄切片机
LKB NOVA
LKB制刀机
LKB 7801A
体式显微镜
XTB-01
本实验项目
消耗材料物品
戊二醛（进口）、锇酸（进口）、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇（优级纯）、丙酮（分析纯）、Epon 812（进口）、DDSA（进口）、MNA（进口）、DMP-30（进口）、方华（进口）、氯仿、脱脂棉、酒精灯、橡皮膏、蜡块、小烧杯（50ml、300ml）、玻璃棒、一次性注射器（1ml、5ml、10ml）、一次性手套、一次性鞋套、双面刀片、单面刀片、滤纸、剪刀、微量移液器、电镜专用弯头镊子（进口）、电镜专用直头镊子（进口）、载网、超薄切片专用硬质玻璃条（进口）、玻璃刀盒（进口）、包埋板等。
备注
任课教师(签名)： 专业负责人(签名)： 主管院长(签名)：
填表日期： 2009 年 11 月 13 日
0728101902
（1）了解扫描电镜样品制备方法及注意事项。（2）了解扫描电镜的工作原理和使用方法，掌握扫描电镜的应用范围及与透射电镜的区别。（3）了解临界点干燥原理，掌握临界点干燥过程和方法。（4）了解离子溅射原理，掌握喷涂金属过程和方法。（5）以上仪器在使用中的注意事项。
（1）取材：样品一般1cm3左右，固定之前对其表面进行清洁。（2）固定：含水样品与透射电镜制备方法一样，坚硬样品如牙齿等可不必固定。（3）脱水：含水样品与透射电镜制备方法一样，坚硬样品如牙齿等可不必脱水。（4）扫描电镜工作原理及结构、开关机过程、上样、观察及拍照。扫描电镜：日立公司产S570。（5）临界点干燥工作原理，干燥媒介液及浓度，干燥过程。干燥装置：日立公司产HCP-2临界点干燥仪。（6）离子溅射工作原理，喷金过程，喷金装置：日立公司产E120离子溅射仪。
日立扫描电镜
S-570
日立临界点干燥仪
HCP-2
日立离子溅射仪
E-102
戊二醛（进口）、锇酸（进口）、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙醇、丙酮（分析纯）、乙酸异戊酯（分析纯）、120黑白胶卷、双面铜质胶带（进口）、扫描电镜专用样品镊子和样品盒（进口）等、无水乙醇（分析纯）、高纯度二氧化碳（99.99﹪）/钢瓶、脱脂棉、一次性鞋套、一次性手套等。
说明：1、课程编号可从本专业的课程计划中查找，实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
0728101903
（1）了解高速和超速离心机工作原理与结构，掌握高速离心和超速离心的过程。
（2）掌握差速离心法、速率区带离心法、等密度离心法。
（3）高速和超速离心的安全操作。
（1）高速和超速离心机原理与结构，高速与超速离心机的区别。
（2）样品的预处理及装载和开、关机的过程
（3）差速离心法、速率区带离心法、等密度离心法操作流程及注意事项。
（4）高速和超速离心机的安全规范。
德国高速离心机
K-70
日立公司超速离心机
CP56G
SCP85H
（1）蔗糖（优级纯）、无水乙醇（分析纯）、氯化铯（优级纯）、蒸馏水（二馏）
（2）脱脂棉、真空脂（进口）、一次性鞋套、一次性手套等。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
0728101904
掌握激光共聚焦显微镜采集方式及注意事项。了解荧光探针的使用及免疫荧光标记方法。
激光共聚焦显微镜
Fv-1000(日本Olympus)
恒温冷冻切片机
CM1900（莱卡公司）
石蜡切片机
LEICA RM2145（莱卡公司）
石蜡包埋机
LEICA EG1160（莱卡公司）
捞片机
Hi1210（莱卡公司）
1个
电烤箱
上海市实验仪器总厂
烤片机
Hi1240（莱卡公司）
微型混合器
WH-90A型（上海亚荣生化仪器厂）
超净工作台
DL-CJ-IN(北京东联哈尔仪器制造有限公司)
二氧化碳孵箱
MCO-15AC(日本Synyo)
离心机
TDZ5-WS(湘仪离心机)
倒置显微镜
Ck×31(日本Olympus)
Wistar大鼠，Hele细胞；刀、剪、镊子等手术器械，切片刀片；可调加样器，24孔培养板、Ep管，胎牛血清、胰蛋白酶、RNA酶；荧光探针：Hoechst(33342、33258），PI，GFAP抗体，Cy3荧光素二抗。酒精、二甲苯、石蜡、甲醇、丙酮、甲醛、载玻片、盖玻片(24×32、10×10）、避光纸，一次性鞋套。
0728101905
掌握激光共聚焦显微镜采集方式（X-Y扫描，X-Y-Z扫描，X-Y-T扫描）及注意事项；了解荧光探针的使用及免疫荧光标记方法。
冰箱
海尔公司
Wistar大鼠，刀、剪、镊子等手术器械，切片刀片，5ml、1ml、5ul-200ul可调加样器， RNA酶，荧光探针：Hoechst(33342、33258），PI，GFAP抗体，Cy3荧光素二抗，二甲苯、石蜡、甲醇、丙酮、甲醛、载玻片、盖玻片(24×32、10×10）、避光纸，一次性鞋套。
0728101906
了解薄层扫描技术、荧光定量技术，通过实际操作，进一步了解并掌握薄层扫描法原理、荧光定量PCR原理和仪器使用方法及其应用范围。
(1)制样：薄层扫描仪需制作玻层板，常用的有丙烯酰胺凝胶样、硅胶板样等；荧光定量PCR仪需96孔板样、八联管样等。(2)仪器介绍： 仪器结构、开机和关机及注意事项。(3)样品前期处理：薄层扫描仪是将样品、样品托盘及托盘盖用去离子水冲洗2～3次，将样品放置托盘正中央、盖上盖子，注意不要产生气泡或水泡。荧光定量PCR仪要对加样后的96孔板盖膜，盖膜要平整、压紧。(4)样品检测：薄层扫描仪是将样品盘放入仪器样品支架上，选择波长、扫描方式，记录坐标，扫描样品。荧光定量PCR仪操作中，开启软件，创建研究文件反应板，设置反应参数，保存文件；将反应板正确放入样品支架上，点击开始扩增。 (5)检测结果保存及输出。(6)数据分析：薄层扫描仪结果主要分析基线、波峰；荧光定量PCR仪实验结果主要分析循环数，CT值、阈值等。
薄层扫描仪
CS-9000
荧光定量PCR仪
7500型
(1)凝胶、玻板。(2)一次性手套、一次性鞋套、无粉手套、防护眼罩，镊子。
(3)96孔板（ABI）、八联管（ABI），荧光探针（ABI）、荧光染料（ABI）。(4)去离子水。
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