UWN吉林大学动物科技实验教学中心
《细胞生物学与细胞工程技术》实验教学大纲
教学单位：畜牧兽医学院
课程名称：细胞生物学与细胞工程技术
英文名称：Technology of Cell Biology and Cell Engineering
课程代码：07281017
课程类别：专业教育课程
课程性质：必修课
学 时 数：课程50学时，实验46学时
课程学分：1.5学分
开课学期：第五学期
面向专业：生物技术（动物）专业
一、实验课程教学目的与任务
《细胞生物学与细胞工程技术》实验课程是生物技术专业的一门必修课，课程主要目的是通过本课程的讲授和操作，理解细胞生物学研究的一些基本方法的原理，掌握细胞生物学及细胞工程技术的基本方法和实验操作技能，为开展生命科学相关研究打下基础。
课程的任务是通过具体实验使学生掌握细胞生物学及细胞工程技术的基本方法和实验操作技能，如：细胞的形态学观察、细胞计数、细胞原代传代培养、细胞的复苏、冻存、细胞的原代培养、细胞的DNA转染技术，细胞核型分析技术、细胞融合技术以及单克隆抗体制备技术等，有效地提高理论课的教学效果，并培养学生树立独立设计实验的思考观念和独立处理问题、解决问题的能力。
二、实验教学基本要求
1、进入无菌室应该换无菌室内专用的实验服和拖鞋后方可进入。
2、实验前，无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌，用70%精擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风机运转10分钟后，才可开始实验操作。
3、实验用品要用70%酒精擦拭后才能带入无菌操作台内。
4、实验结束后，将所有实验物品带出生物安全柜。如需要继续进行下一个实验，则用70%酒精擦拭无菌操作台面，再让无菌操作台风机运转10分钟后，才可进行下一个实验操作。
5、实验操作时应注意自身的安全，必须穿戴实验服与手套后才进行实验
6、要独立完成符合规范要求的实验报告，做好实验记录并及时总结实验结果。
三、学生应掌握的实验技术及基本技能
1.掌握细胞培养物品及试剂的灭菌方法。
2.掌握细胞培养所需无菌技术的操作要领，注意事项和基本要求，培养和提高独立实验的能力。
3.掌握细胞的形态观察、细胞计数技术、细胞的原代培养技术、传代培养技术、细胞的DNA转染技术，细胞核型分析技术、细胞融合技术以及单克隆抗体制备技术等内容。
四、实验项目内容、学时分配和每组人数
序号
实验项目
内容提要
学时分配
每组
人数
实验类型
实验性质
1
细胞的形态观察和细胞计数
观察BHK-21细胞,SP20细胞的形态并进行计数及活细胞的鉴定
4
基础性
必做
2
细胞的传代培养、细胞冻存和细胞复苏
进行贴壁细胞（BHK-21）的传代培养
3
细胞冻存和细胞复苏
复苏BHK-21细胞，冻存SP20细胞
绿色荧光蛋白（GFP）在细胞中的表达
制备GFP表达载体，转染BHK-21细胞
8
综合性
5
饲养层细
胞的制备
制备健康未免疫的小鼠腹腔内的巨噬细胞
6
小鼠脾细胞
与骨髓瘤细
胞的融合
用PEG作融合剂将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合
7
融合细胞
的筛选
用ELISA方法筛选融合的细胞
的克隆
用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆
9
杂交瘤细胞
腹水的制备
阳性杂交瘤细胞经放大培养注入小鼠腹腔制备腹水
五、实验教材及主要参考书：
实验教材：王铁东，张丽影，于浩主编(2009)，《细胞生物学实验指导》。
主要参考书：
[1]中国医科大学生物教研室编，《医用生物学实验指导》，中国医科大学出版，(2001)。
[2]程宝鸾主编,《动物细胞培养技术》，华南理工大学出版社，（2000）。
[3]陈瑞铭主编,《动物组织培养技术及其应用》，科学出版社，(1998)。
[4]薛庆善主编,《体外培养的原理与技术》，科学出版社，(2001)。
[5]安利国主编,《细胞工程》，科学出版社，(2005)。
六、考核要求、考核方式及成绩评定标准
从实验理论、实验设计和结果分析、平时实验成绩三方面进行综合考核给出实验成绩。
本课程成绩中实验理论占20%，实验设计和结果分析占30%，平时实验成绩占50%；平时实验成绩中实验课出勤率及课堂表现占10%，实验报告（书面）（包括书写规范性、完整性及实验数据的正确性）占90%。
七、制订人：王铁东 张丽颖
八、审核人：欧阳红生 日 期：2009年11月13日
九、学院审定记录：
本实验教学大纲已经学院学术委员会审核通过。
教学院长签字：
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称：动物科技实验教学实验中心 实验室名称：生物技术综合实验室
实验项目所属课程名称
细胞生物学与细胞工程技术
课程编号
07281017
课程类别
(打√)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
生物技术专业
√
基础
设计
综合
研究
选做
其他
实验项目名称
实验项目编号
0728101701
实验学时数
实验分组情况
每组 1 人
实验目的
通过本次实验掌握倒置荧光显微镜的使用方法，掌握培养中的动物细胞的一般形态和生长状态和细胞计数的原理和方法。
实验内容
1、学习倒置相差显微镜的使用方法
2、观察BHK-21细胞及SP20细胞形态
2、细胞计数SP20细胞，并通过染色法判定细胞死活
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
倒置显微镜
Motic AE20
20台
低速台式大容量离心机
TDL-40B
4台
CO2培养箱
Themo3111
微电脑电热恒温水槽
SSW-420-2S
普通冰箱
BCD-239BTC
微量移液器
芬兰雷勃Finnpipette® Colour
20套
超洁净工作台
HF force-1500
25台
本实验项目
消耗材料物品
BHK-21细胞、SP20细胞、载玻片、盖玻片、血细胞计数板、细胞培养瓶、0.5ml微量离心管、微量移液器头、移液器、台盼蓝、镜头纸、酒精棉球等。
备注
说明：1、课程编号可从本专业的课程计划中查找，实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
任课教师(签名)： 专业负责人(签名)： 主管院长(签名)：
填表日期： 2009 年 8 月 28 日
细胞的传代培养技术
0728101702
通过本次实验掌握无菌操作技术和动物细胞的传代培养方法。
1、无菌操作技术
2、BHK-21细胞传代培养
无菌吸管、离心管、细胞培养瓶、移液器、小牛血清、MEM培养基、胰蛋白酶，微量移液器头、BHK-21细胞等。
填表日期： 2009年 8月 28日
细胞的冻存和复苏
0728101703
通过本次实验熟练掌握无菌操作技术和动物细胞的冷冻保存及复苏技术。
2、BHK-21细胞冻存
3、SP20细胞的复苏
液氮罐
YDS-35
2台
超低温冰箱
BCD-246K
BHK-21细胞、冻存的SP20细胞、无菌吸管，微量移液器头、离心管，细胞培养瓶，细胞冻存管、移液器、RPMI1640培养基、MEM培养基。
0728101704
通过本次实验掌握外源基因导入动物细胞的方法及荧光显微镜的使用。
1、无菌质粒的制备
2、细胞传代
3、细胞转染
4、GFP荧光的观察
超速台式离心机
TGL-16B
真空泵
GM-0.33II
倒置荧光显微镜
TE2000-U
BHK-21细胞、载玻片，盖玻片，离心管，灭菌的吸头，直径35mm培养皿，细胞培养瓶、MEM培养基、带有GFP的载体、双抗、胰蛋白酶、无水乙醇等，微量移液器头。
生物技术专业（动物）
饲养层细胞的制备
0728101705
通过本实验学习使学生掌握从小鼠的腹腔中取巨噬细胞的技术
1. 处死实验动物
2. 从小鼠腹腔中取巨噬细胞的方法
3. 细胞计数
4. 滴板
37℃细胞培养箱
低速台式离心机
超净工作台
HF force-1500/C
健康未免疫小鼠、50ml带刻度的离心管、注射器、滴管、96孔细胞培养
板、烧杯移液器、移液器吸头、血细胞计数板、台盼蓝、1.5ml离心管、眼科剪子、眼科镊子、棉球、酒精、PRMI1640培养基、HAT、双抗等。
小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞的融合
0728101706
通过本实验的学习使学生掌握细胞融合的原理和细胞融合的过程。
1. 眼球采血处死实验动物
2. 打开小鼠腹腔，取脾脏
3. 在无菌铜网上研磨脾脏
4. 脾细胞与SP2/0细胞混合并用PEG融合
5. 融合细胞培养并观察细胞融合情况
50ml带刻度的离心管、注射器、滴管、细滴管、细胞培养瓶、铜网、手术剪、眼科镊子、96孔细胞培养板、烧杯；小鼠骨髓瘤细胞（sp2/0）、BALB/c健康免疫小鼠（6-8周龄）；液体PEG1000、HAT；RPMI1640细胞培养基、小牛血清、75%酒精、双抗等。
融合细胞的筛选
0728101707
通过对本实验的学习，使学生掌握ELISA的原理及ELISA的操作方法。
1. 包被抗原
2. 封闭
3. 加第一抗体
4. 加第二抗体
5. 加底物显色
6. 终止显色
7.结果测定
Multiskan Mk3酶标仪
353
微电脑电热恒温箱
HPX-9052MBE
自动酶标洗板机
DEM-II
连排移液器
10套
酶标板、抗鼠辣根过氧化物酶（HRP）标记的IgG、OPD（邻苯二胺）、吸头等。
融合细胞的克隆
0728101708
通过对本实验的学习，使学生掌握细胞克隆的方法—有限稀释法。
1.饲养层细胞制备
2.细胞计数
3.有限稀释法稀释细胞
4.滴板培养并逐日观察
滴管、96孔细胞培养板、烧杯、1.5ml离心管、吸头、移液器、RPMI1640细胞培养基、HT、新生小牛血清、双抗等
实验教学中心名称：动物科技实验教学实验中心 实验室名称生物技术综合实验室
杂交瘤细胞腹水的制备
0728101709
通过对本实验的学习，使学生掌握腹水的制备过程和从小鼠腹腔抽取腹水的方法。
1.小鼠腹腔内注射医用液体石蜡油
2.收集杂交瘤细胞，离心洗涤并细胞计数
3.向小鼠腹腔注射杂交瘤细胞
4.7天后收集腹水、分装、-70℃保存备用。
健康未免疫小鼠、50ml带刻度的离心管、注射器、液体石蜡油、RPMI1640培养液、1.5ml离心管、吸管、移液器、吸头、血细胞计数板等。
填表日期：2009 年 8 月 28 日UWN吉林大学动物科技实验教学中心
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