X34吉林大学动物科技实验教学中心
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称：动物科技实验教学实验中心 实验室名称：生物技术综合实验室
实验项目所属课程名称
细胞生物学与细胞工程技术
课程编号
07281017
课程类别
(打√)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
生物技术专业
√
实验类型
基础
设计
综合
研究
实验性质
必做
选做
其他
实验项目名称
细胞的形态观察和细胞计数
实验项目编号
0728101701
实验学时数
4
实验分组情况
每组 1 人
实验目的
通过本次实验掌握倒置荧光显微镜的使用方法，掌握培养中的动物细胞的一般形态和生长状态和细胞计数的原理和方法。
实验内容
1、学习倒置相差显微镜的使用方法
2、观察BHK-21细胞及SP20细胞形态
2、细胞计数SP20细胞，并通过染色法判定细胞死活
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
倒置显微镜
MoticAE20
20台
低速台式大容量离心机
TDL-40B
4台
CO2培养箱
Themo3111
微电脑电热恒温水槽
SSW-420-2S
普通冰箱
BCD-239BTC
微量移液器
芬兰雷勃Finnpipette® Colour
20套
超洁净工作台
HF force-1500
25台
本实验项目
消耗材料物品
BHK-21细胞、SP20细胞、载玻片、盖玻片、血细胞计数板、细胞培养瓶、0.5ml微量离心管、微量移液器头、移液器、台盼蓝、镜头纸、酒精棉球等。
备注
说明：1、课程编号可从本专业的课程计划中查找，实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
任课教师(签名)： 专业负责人(签名)： 主管院长(签名)：
填表日期： 2009 年 8 月 28 日
细胞的传代培养技术
0728101702
通过本次实验掌握无菌操作技术和动物细胞的传代培养方法。
1、无菌操作技术
2、BHK-21细胞传代培养
无菌吸管、离心管、细胞培养瓶、移液器、小牛血清、MEM培养基、胰蛋白酶，微量移液器头、BHK-21细胞等。
填表日期： 2009年 8月 28日
细胞的冻存和复苏
0728101703
通过本次实验熟练掌握无菌操作技术和动物细胞的冷冻保存及复苏技术。
2、BHK-21细胞冻存
3、SP20细胞的复苏
液氮罐
YDS-35
2台
超低温冰箱
BCD-246K
BHK-21细胞、冻存的SP20细胞、无菌吸管，微量移液器头、离心管，细胞培养瓶，细胞冻存管、移液器、RPMI1640培养基、MEM培养基。
绿色荧光蛋白（GFP）在细胞中的表达
0728101704
8
通过本次实验掌握外源基因导入动物细胞的方法及荧光显微镜的使用。
1、无菌质粒的制备
2、细胞传代
3、细胞转染
4、GFP荧光的观察
超速台式离心机
TGL-16B
真空泵
GM-0.33II
倒置荧光显微镜
TE2000-U
BHK-21细胞、载玻片，盖玻片，离心管，灭菌的吸头，直径35mm培养皿，细胞培养瓶、MEM培养基、带有GFP的载体、双抗、胰蛋白酶、无水乙醇等，微量移液器头。
生物技术专业（动物）
饲养层细胞的制备
0728101705
通过本实验学习使学生掌握从小鼠的腹腔中取巨噬细胞的技术
1. 处死实验动物
2. 从小鼠腹腔中取巨噬细胞的方法
3. 细胞计数
4. 滴板
37℃细胞培养箱
低速台式离心机
超净工作台
HF force-1500/C
健康未免疫小鼠、50ml带刻度的离心管、注射器、滴管、96孔细胞培养
板、烧杯移液器、移液器吸头、血细胞计数板、台盼蓝、1.5ml离心管、眼科剪子、眼科镊子、棉球、酒精、PRMI1640培养基、HAT、双抗等。
小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞的融合
0728101706
6
通过本实验的学习使学生掌握细胞融合的原理和细胞融合的过程。
1. 眼球采血处死实验动物
2. 打开小鼠腹腔，取脾脏
3. 在无菌铜网上研磨脾脏
4. 脾细胞与SP2/0细胞混合并用PEG融合
5. 融合细胞培养并观察细胞融合情况
50ml带刻度的离心管、注射器、滴管、细滴管、细胞培养瓶、铜网、手术剪、眼科镊子、96孔细胞培养板、烧杯；小鼠骨髓瘤细胞（sp2/0）、BALB/c健康免疫小鼠（6-8周龄）；液体PEG1000、HAT；RPMI1640细胞培养基、小牛血清、75%酒精、双抗等。
融合细胞的筛选
0728101707
通过对本实验的学习，使学生掌握ELISA的原理及ELISA的操作方法。
1. 包被抗原
2. 封闭
3. 加第一抗体
4. 加第二抗体
5. 加底物显色
6. 终止显色
7. 结果测定
Multiskan Mk3 酶标仪
353
微电脑电热恒温箱
HPX-9052MBE
自动酶标洗板机
DEM-II
连排移液器
10套
酶标板、抗鼠辣根过氧化物酶（HRP）标记的IgG、OPD（邻苯二胺）、吸头等。
融合细胞的克隆
0728101708
通过对本实验的学习，使学生掌握细胞克隆的方法—有限稀释法。
1.饲养层细胞制备
2.细胞计数
3.有限稀释法稀释细胞
4.滴板培养并逐日观察
滴管、96孔细胞培养板、烧杯、1.5ml离心管、吸头、移液器、RPMI1640细胞培养基、HT、新生小牛血清、双抗等
实验教学中心名称：动物科技实验教学实验中心 实验室名称生物技术综合实验室
杂交瘤细胞腹水的制备
0728101709
通过对本实验的学习，使学生掌握腹水的制备过程和从小鼠腹腔抽取腹水的方法。
1.小鼠腹腔内注射医用液体石蜡油
2.收集杂交瘤细胞，离心洗涤并细胞计数
3.向小鼠腹腔注射杂交瘤细胞
4.7天后收集腹水、分装、-70℃保存备用。
健康未免疫小鼠、50ml带刻度的离心管、注射器、液体石蜡油、RPMI1640培养液、1.5ml离心管、吸管、移液器、吸头、血细胞计数板等。
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