pBg吉林大学动物科技实验教学中心
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称：动物科技实验教学中心 实验室名称：生物化学与酶工程实验室
实验项目所属课程名称
蛋白质与酶工程
课程编号
07281003
课程类别
(打)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
生物技术专业
√
实验类型
(打√)
基础
设计
综合
研究
实验性质
必做
选做
其他
实验项目名称
辣根过氧化物酶标记抗体制备
实验项目编号
0728100301
实验学时数
6
实验分组情况
每组 2 人
实验目的
学习免疫标记技术的种类及应用
学习应用辣根过氧化物酶标记抗体的操作
实验内容
戊二醛交联二步法制备HRP标记抗体主要内容是先使酶与戊二醛反应,除去未反应的戊二醛，再使已“活化”的酶分子与抗体分子的氨基结合，最后加入少量的赖氨酸封闭被戊二醛激活的酶的残基。
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
双向恒温磁力搅拌器
95-2
10
高速台式离心机
TGL-16B
微电脑电热恒温水槽
SSW-420-2S
5
紫外可见分光光度计
T6新世
本实验项目
消耗材料物品
1.25%戊二醛液；1M PH9.5碳酸盐缓冲液；0.2M赖氨酸溶液；0.15M PH7.4 PBS及生理盐水；PH7.8饱和硫酸铵溶液及半饱和硫酸铵溶液；萘氏试剂及聚乙二醇(PEG，MW2000)；纯化的特异性抗体或抗Ig抗体；HRP(RZ>3.0)；
透析袋，大、小烧杯，试管，吸管。
备注
说明：1、课程编号可从本专业的课程计划中查找，实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
任课教师(签名)： 王大成 专业负责人(签名)： 主管院长(签名)：
填表日期：2009 年 8 月 28 日
碱性磷酸酶Km值的测定
0728100302
2
每组 1 人
加深酶促反应动力学基本知识的理解和记忆； 熟记利用双倒数法测定Km值的原理
选择不同浓度的磷酸苯二钠为碱性磷酸酶底物，磷酸苯二钠被酶水解后，生成酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4—氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物，以1/A 为纵坐标，1/[s]为横坐标，作图求出碱性磷酸酶的Km值。
底物液(10mmol/l，磷酸苯二钠)；0．1mol/L磷酸盐缓冲液；酶液；0．5mol/LNaOH；0．3％ 4-氨基安替比林；0．5％铁氰化钾；中号试管。
任课教师(签名)： 王大成 专业负责人(签名)： 欧阳红生 主管院长(签名)：
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