FU9吉林大学动物科技实验教学中心
《基因工程实验技术》实验教学大纲
教学单位：畜牧兽医学院
课程名称：基因工程实验技术
英文名称：Experiment of Gene Engineering
课程代码：07281007
课程类别：专业教育课
课程性质：必修课
学时数：课程50学时，实验46学时
课程学分：1.5学分
开课学期：第2个短学期
面向专业：生物技术（动物）专业
一、实验课程教学目的与任务
《基因工程实验技术》是生物技术（动物）专业的一门专业教育课程，通过本课程的学习，加深学生对基因工程理论内容的理解，从而掌握基因工程的基本实验方法和技能；掌握核酸的操作方法、DNA重组技术以及检测技术的实验方法。
本课程的实验内容是基因工程理论教学内容的实践，主要包括PCR实验、DNA凝胶电泳、DNA片段回收、DNA连接、DNA转化、质粒DNA提取、DNA酶切、DNA Southern blot分析、RNA提取、实时定量PCR。其任务是让学生掌握基因工程的基本实验方法和技能，锻炼学生的动手能力，通过实验，使学生了解基因工程知识和理论的由来。通过感性知识，加深对理性知识的理解；培养学生观察、比较、分析、综合等科学思维能力，以及独立工作的能力和实事求是的科学作风。
二、实验教学基本要求
1．独立完成实验内容，取得较好的实验；在实验课前提前领取实验指导，理解实验原理及实验方案，掌握基因工程的主要环节及与各环节相关的理论知识和实验方法。
2．掌握各种仪器的使用，了解其性能参结果，撰写合格的实验报告。
三、学生应掌握的实验技术及基本技能
1.学生能基本掌握所开实验的方法。
2.熟悉DNA重组的基本过程。
2.掌握台式离心机、电泳设备的使用。
3.培养和提高学生独立操作的能力。
四、实验项目内容、学时分配和每组人数
序号
实验项目
内容提要
学时分配
每组人数
实验类型
实验性质
1
PCR实验
聚合酶链式反应（PCR）
2学时
基础性
必做
2
DNA凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，紫外灯下检测，拍照
3
DNA片段回收
琼脂糖凝胶电泳，凝胶回收DNA片段
4学时
4
DNA连接
PCR产物与T载体的连接
5
DNA转化
E.coli感受态细胞的制备，热激法转化E.coli感受态细胞
6
质粒DNA提取
细菌培养及回收，碱变性法提取质粒DNA，DNA电泳及检测
综合性
7
DNA酶切
DNA酶切，DNA电泳，酶切结果分析
8
DNA Southern blot分析
DNA酶切，DNA电泳，Southern印迹杂交及检测
24学时
9
RNA提取
RNA提取，RNA电泳
选做
10
实时定量PCR
实时定量PCR技术，标准曲线的制作，待测样品的定量检测
五、实验教材及主要参考书：
【1】逄大欣，欧阳红生等．《基因工程实验指导》，自编教材，2006年
【2】吴乃虎．《基因工程原理》上下．科学出版社，第二版，2001年
【3】张惠展．《基因工程》．华东理工大学出版社，第一版，2005年
【4】J.萨姆布鲁克．分子克隆实验指南．科学出版社，第三版，2002年
【5】Jeremy W. Dale et al.．From Gene to Genomes:Concepts and Applications
of DNA Technology．科学出版社.2004年，
【6】C.W.迪芬巴赫等．PCR技术实验指南．1998年，科学出版社.
【7】A.J.哈伍德．DNA及RNA基本实验技术，科学出版社.2002年
【8】梁国栋．最新分子生物学实验技术．科学出版社.2001年，
六、考核要求、考核方式及成绩评定标准
本课程的考核采取三个环节：实验预习﹑实验过程﹑实验报告，评分采用百分制。本门实验课的最终成绩按下式计算：
实验成绩＝[∑（预习成绩×10％＋实验过程成绩×40％＋报告成绩×50％）。
七、制订人：任林柱
八、审核人： 日 期：2009年11月14日
九、学院审定记录：
本实验教学大纲已经学院教学委员会审核通过。
教学院长签字：
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称：动物科技实验教学中心 实验室名称：分子生物学实验室
实验项目所属课程名称
基因工程实验技术
课程编号
07281007
课程类别
(打√)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
生物技术专业（动物）
√
基础
设计
综合
研究
其他
实验项目名称
实验项目编号
0728100701
实验学时数
实验分组情况
每组 1 人
实验目的
掌握PCR反应的基本原理与实验技术。
实验内容
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
基因扩增仪
TC-25/H
6台
离心机
TGL-16B
移液器
0.2ml
10支
0.01ml
冰盒
10个
本实验项目
消耗材料物品
0.2ml枪头，0.2ml离心管，引物，模板DNA，PCR试剂盒
备注
说明：1、课程编号可从本专业的课程计划中查找，实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
任课教师(签名)： 专业负责人(签名) 主管院长(签名)：
填表日期：2009 年 11月 14 日
0728100702
掌握水平式琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度、质粒DNA的构型以及分子量的大小。
电泳仪
DYY-10C
5台
水平式电泳槽
DYCP-31D
5个
UVP凝胶成像系统
031606-001
1台
美的微波炉
KD23B-AV
BS系列电子天平
BS124S
0.2ml枪头，1×TAE电泳缓冲液，一次性手套，DNA Marker，EB，琼脂糖，三角瓶
任课教师(签名)： 专业负责人(签名)： 主管院长(签名)：
0728100703
掌握琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段的原理与操作。
水浴锅
SSW-420-2S
2台
1ml
1ml枪头，0.2ml枪头，1×TAE电泳缓冲液，一次性手套，DNA Marker，EB，琼脂糖，手术刀片，DNA凝胶回收试剂盒，三角瓶
0728100704
学掌握DNA分子（PCR产物）与T载体连接的原理与操作方法。
pMD-18T-simple试剂盒，T4 DNA连接酶，0.2ml枪头，0.2ml离心管
0728100705
熟悉重组DNA分子转化E.coli的原理与基本操作方法；掌握E.coli感受态细胞的制备及DNA转化的方法；了解提高转化效率的基本思路。
超净工作台
SW-CJ-IF
制冰机
SIM-F140
恒温振荡器
HZQ-C
培养箱
HPX-9052MBE
低温离心机
40528746
感受态细胞，LB液体培养基，LB液体培养基（加AMP抗性），1ml枪头，0.2ml枪头，1.5ml离心管，50ml离心管
0728100706
掌握碱变性制备质粒DNA的原理及方法。
DNA质粒提取试剂盒，1ml枪头，0.2ml枪头，LB液体培养基，LB固体培养基平板（加AMP），1.5ml离心管，丙三醇，1×TAE电泳缓冲液，一次性手套，DNA Marker，EB，琼脂糖
0728100707
掌握用限制性内切酶酶切DNA片段的原理与方法。
质粒DNA，限制性内切酶，0.2ml枪头，500uL离心管，1×TAE电泳缓冲液，一次性手套，DNA Marker，EB，琼脂糖
0728100708
28学时
掌握分子杂交的原理和过程；掌握Southern印迹杂交技术的主要方法。
分子杂交仪
L200
3台
1ml枪头，0.2ml枪头，1×TAE电泳缓冲液，一次性手套，DNA Marker，EB，琼脂糖，Southern印迹杂交及检测试剂盒，尼龙膜，Southern杂交液，中和液，变性液，20×SSC，2×SSC，WashⅡ，Anti-DIG-AP，Protein K，WashⅠ
0728100709
熟悉总RNA和mRNA提取的基本原理，掌握从真核细胞中提取总RNA的方法。
1ml枪头，0.2ml枪头，1×TAE电泳缓冲液，一次性手套，RNA Marker，EB，琼脂糖，TRnzol，PBS，乙醇，Tris-平衡酚，氯仿，猪肝脏，DEPC，液氮，二甲基甲酰铵，异丙醇
0728100710
掌握实时定量PCR技术的原理及操作方法。
实时定量PCR仪
ABI7300
10ul
10ul枪头，0.2ml枪头，0.2ml离心管，引物，模板DNA，实时定量PCR反应试剂盒
填表日期：2009年 11月 14 日FU9吉林大学动物科技实验教学中心
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