QLK吉林大学动物科技实验教学中心
《蛋白质与酶工程》实验教学大纲
教学单位:畜牧兽医学院
课程名称:蛋白质与酶工程
英文名称:Protein and Enzyme Engineering
课程代码:07281003
课程类别:专业教育课程
课程性质:必修课
实验学时:课程34学时,实验8学时
课程学分:2学分
开课学期:第六学期
面向专业:生物技术(动物)专业
一、实验课程教学目的与任务
《蛋白质与酶工程实验》是一门面向生物技术专业的专业实验技术课程。课程主要目的是训练学生掌握《蛋白质与酶工程》基本的实验技能,培养学生独立分析解决问题的能力和严谨求实、不断创新的科学态度。主要课程目的任务是熟悉蛋白质与酶的性质,掌握酶制剂的标记方法,掌握酶活性和动力学参数测定技术等。
二、 实验教学基本要求
本课程的教学方式是在教师的指导下,由学生自己动手独立完成有关的实验。实验前,学生应独立完成有关实验项目的预习,并写出预习报告。由实验指导教师讲授实验的基本内容(目的要求、基本原理、操作步骤及注意事项等)。
学生在实验中应认真操作,严格掌握整个反应体系中的抗体等的含量,仔细观察实验现象并加以分析,作好原始记录,正确处理实验数据,分析实验结果,并作出准确可靠的结论。
三、学生应掌握的实验技术及基本技能
培养学生学习蛋白质与酶工程研究中常用的基本方法和实验操作技能,提高学生的动手操作能力,掌握常用的实验方法。通过学习,学生应达到以下要求:
1.掌握酶工程常用方法的原理及操作技术;
2.掌握酶活性测定原理,掌握米氏常数等参数的测定方法。
3. 掌握戊二醛法制备辣根过氧化物酶标记抗体制备技术。
4.培养实事求是的科学态度和严谨认真的工作作风。
四、实验项目内容、学时分配和每组人数
序号
实验项目
内容提要
学时分配
每组人数
实验类别
实验性质
1
辣根过氧化物酶标记抗体制备
采用戊二醛法制备HRP标记抗体
6
2
基础性
必做
碱性磷酸酶Km值的测定
测定酶促反应动力学参数米氏常数
3
4
五、实验教材及主要参考书:
[1]《酶与酶工程》,袁勤生、赵健主编,华东理工大学出版社,2005
[2]孙俊良,《酶制剂生产技术》,科学出版社,2004
六、考核要求、考核方式及成绩评定标准
以实验报告、出勤、课堂表现综合考核给出实验成绩。本课程考核办法一般是根据不同的教学内容布置不同的课堂作业,根据不同的内容制定不同的评分标准,采用现场打分并公示。实验课出勤率及课内表现等平时实验成绩占10%,实验报告(书面)(包括书写规范性、完整性及实验数据的正确性)等综合实验成绩占90%。
七、制定人:王大成
八、审核人:欧阳红生 日 期:2009年11月13日
九、学院审定记录:
本实验教学大纲已经学院教学委员会审核通过。
教学院长签字:
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称:动物科技实验教学中心 实验室名称:生物化学与酶工程实验室
实验项目所属课程名称
蛋白质与酶工程
课程编号
07281003
课程类别
(打)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
生物技术专业
√
实验类型
(打√)
基础
设计
综合
研究
选做
其他
实验项目名称
实验项目编号
0728100301
实验学时数
实验分组情况
每组 2 人
实验目的
学习免疫标记技术的种类及应用
学习应用辣根过氧化物酶标记抗体的操作
实验内容
戊二醛交联二步法制备HRP标记抗体主要内容是先使酶与戊二醛反应,除去未反应的戊二醛,再使已“活化”的酶分子与抗体分子的氨基结合,最后加入少量的赖氨酸封闭被戊二醛激活的酶的残基。
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
双向恒温磁力搅拌器
95-2
10
高速台式离心机
TGL-16B
微电脑电热恒温水槽
SSW-420-2S
5
紫外可见分光光度计
T6新世
本实验项目
消耗材料物品
1.25%戊二醛液;1MPH9.5碳酸盐缓冲液;0.2M赖氨酸溶液;0.15MPH7.4 PBS及生理盐水;PH7.8饱和硫酸铵溶液及半饱和硫酸铵溶液;萘氏试剂及聚乙二醇(PEG,MW2000);纯化的特异性抗体或抗Ig抗体;HRP(RZ>3.0);
透析袋,大、小烧杯,试管,吸管。
备注
说明:1、课程编号可从本专业的课程计划中查找,实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
任课教师(签名): 王大成 专业负责人(签名): 主管院长(签名):
填表日期: 2009 年 8 月 28 日
0728100302
每组 1 人
加深酶促反应动力学基本知识的理解和记忆; 熟记利用双倒数法测定Km值的原理
选择不同浓度的磷酸苯二钠为碱性磷酸酶底物,磷酸苯二钠被酶水解后,生成酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4—氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物,以1/A 为纵坐标,1/[s]为横坐标,作图求出碱性磷酸酶的Km值。
底物液(10mmol/l,磷酸苯二钠);0.1mol/L磷酸盐缓冲液;酶液;0.5mol/LNaOH;0.3% 4-氨基安替比林;0.5%铁氰化钾;中号试管。
任课教师(签名): 王大成 专业负责人(签名): 欧阳红生 主管院长(签名):
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