RF3吉林大学动物科技实验教学中心
《PCR技术》实验教学大纲
教学单位:畜牧兽医学院
课程名称:PCR技术(PCR Technology)
课程代码:07281001
课程类别:专业教育课程
课程性质:选修课
学 时 数:课程20学时,实验16学时
课程学分:1学分
开课学期:第六学期
面向专业:动物科学(实验动物)专业
一、实验课程教学目的与任务
《PCR技术》实验课程是生命科学实验室里最常用的获得和分析特异核酸片段的技术,通过本课程的学习,理解PCR的原理和方法。
本课程主要内容为猪基因组DNA提取和PCR及PCR产物电泳检测、PCR引物设计、鼠组织RNA提取和反转录PCR检测GAPDH和β-actin。学习PCR实验和设计方法,为开展科学研究打好基础。学习PCR技术中常用的基本方法和实验操作技能,提高学生的动手操作能力。
二、实验教学基本要求
1. 能够通过阅读实验教材、检索查阅PCR技术有关资料和思考问题;独立完成实验内容、撰写合格的实验报告;培养学生独立实验的能力,逐步形成自主实验的基本能力。
2. PCR实验易受到产物的污染而出现假阳性,产物和模板要分开存放,在实验室不同区域进行。
3.产物电泳时,要使用有致癌作用的EB染料,EB染料污染过的吸头和电泳设备要在固定区域内进行,操作时要戴一次性手套。
三、学生应掌握的实验技术及基本技能
1.学生能基本掌握所开实验的方法要领,包括学会DNA和RNA的提取方法,提取过程中,组织样品及所用器具的处理方法
2.掌握PCR引物设计、PCR、RT-PCR和PCR结果检测技术和分析方法。
3.培养和提高学生独立操作和实验设计的能力。使学生较为系统全面地掌握运用PCR研究基因结构和基因表达的技术和方法。
四、实验项目内容、学时分配和每组人数
序号
实验项目
内容提要
学时分配
每组人数
实验类型
实验性质
1
检测猪性别 PCR实验
学习动物组织DNA提取、PCR及PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测
6
2
综合性
必做
鼠GADPH和β-actin RT-PCR引物设计
学习PCR引物设计一般原则,RT-PCR和实时定量PCR引物设计方法
基础
3
鼠组织GADPH RT-PCR分析
学习设计动物组织基因表达分析的RT-PCR方法,学习动物组织RNA提取方法、RT-PCR方法
4
设计
五、实验教材及主要参考书:
1.黄留玉等编著,《PCR技术原理、方法与应用》,化学工业出版社,2005年第一版
2.[美]C.W.迪芬巴赫等编著,《PCR技术实验指南》,科学出版社,2004年第二版
六、考核要求、考核方式及成绩评定标准
以实验报告、出勤、PCR实验掌握情况和结果分析是否正确综合考核给出实验成绩。
本课程考核办法根据不同的教学内容布置不同的课堂作业,根据不同的内容制定不同的评分标准,而每次实验课出勤率及课内表现占30%,实验报告(书面)(包括书写规范性、完整性及实验数据及结论的正确性)占70%。实验总评成绩基础和综合实验成绩占40%,设计实验成绩占60%。
七、制定人:欧阳红生
八、审核人:宋宇 日 期:2009年11月13日
九、学院审定记录:
本实验教学大纲已经学院教学委员会审核通过。
教学院长签字:
吉林大学畜牧兽医学院实验项目卡
实验教学中心名称:动物科学实验教学实验中心 实验室名称:分子生物学实验室
实验项目所属课程名称
PCR技术
课程编号
07281001
课程类别
(打√)
普通教育课程
学科基础课程
专业教育课程
实践教学环节
面向专业
动物科学(实验动物)
√
综合
研究
选做
其他
实验项目名称
实验项目编号
0728100101
实验学时数
实验分组情况
每组 2 人
实验目的
掌握PCR鉴别动物性别的原理;
掌握动物组织DNA提取方法;
掌握PCR方法
掌握PCR产物检测的琼脂糖电泳方法
实验内容
本实验项目所用的主要仪器设备
仪器设备名称
规格型号
数 量
基因扩增仪
TC-25/H
微电脑控制电泳仪
DYY-10C
水平式电泳槽
DYCP-31D
高速台式离心机
TGL-16B
紫外分析仪
WD9403D
本实验项目
消耗材料物品
猪组织(肝或尾)
猪性别检测试剂盒
动物组织DNA提取试剂盒
2×Taq PCR MasterMix
DL2000
琼脂糖
微离心管(1.5ml,0.5ml,0.2ml)
可调移液器吸嘴
Tris
EDTA
备注
说明:1、课程编号可从本专业的课程计划中查找,实验项目编号为课程编号+2位顺序号。
2、项目卡各栏可根据内容进行调整。超出1页的请双面打印。
任课教师(签名): 欧阳红生 专业负责人(签名): 主管院长(签名):
填表日期:2009 年 8 月 28 日
实验教学中心名称:动物科学实验教学实验中心 实验室名称:生物信息学实验室
每组 1 人
掌握PCR引物设计原理;
掌握引物设计软件使用方法
掌握动物组织DNA、mRNA样品分析用引物设计方法;
掌握实时定量用引物及探针设计方法
学习引物设计方法,设计出鼠GADPH和β-actin表达分析用引物设计
微机
40
生物信息学服务器
打印纸
任课教师(签名):欧阳红生 专业负责人(签名): 主管院长(签名):
0728100103
每组 4 人
掌握动物组织RNA提取和动物组织基因表达分析的RT-PCR方法
为学生准备鼠组织样品和相关试剂,要求学生设计分析组织中GADPH的RT-PCR实验,并实验动物组织RNA提取、PCR及PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测
生物安全柜
Hfsafe-1500/C
5
鼠组织(肝、脾或肾)
猪GAPDH检测用引物
BIOZOL总RNA提取试剂
RNA safeguard保存试剂
DEPC
Quant一步法RT-PCR试剂盒
液氮
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